ELISA常見組織樣本制備方法及處理指南
點(diǎn)擊次數(shù):7375 日期:2018/7/5 12:53:01
為了保證ELISA實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性,在收集標(biāo)本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃。我們提倡新鮮樣品應(yīng)盡早檢測,對收集后一周內(nèi)檢測的樣本,及時(shí)儲存在4℃?zhèn)溆。如有特殊原因需要周期性收集樣本,在取材后講標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-80℃條件下保存。因冰箱與室溫有一定溫差,蛋白容易降解,直接影響實(shí)驗(yàn)質(zhì)量,故應(yīng)避免反復(fù)凍融。不同的樣本請根據(jù)實(shí)際情況處理。
樣品制備方法
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成分時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成分時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
5.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
注:
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樣本需清澈透明,如有沉淀物,請離心除去后再測
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請勿使用溶血、高血脂或污染的樣本
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凍結(jié)血清融解后可上下顛倒充分混勻宣輕緩, 不要強(qiáng)烈震蕩