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血清總補(bǔ)體溶血活性（CH50）測定操作說明書
點(diǎn)擊次數(shù)：8690 日期：2018/7/6 12:37:36
血清總補(bǔ)體溶血活性（CH50）實(shí)驗(yàn)原理
利用綿羊細(xì)胞與相應(yīng)抗體（溶血素）結(jié)合成的復(fù)合物，可激活血清中的補(bǔ)體，導(dǎo)致紅細(xì)胞溶解，當(dāng)紅細(xì)胞和溶血素量一定時(shí)，在規(guī)定反應(yīng)的時(shí)間內(nèi)，溶血程度與補(bǔ)體量及活性呈正相關(guān)。在接近50%溶血（CH50）時(shí)，二者之間近似直線關(guān)系，故以50%溶血作為最敏感的判斷終點(diǎn)。以引起50%溶血所需的最小補(bǔ)體量為一個(gè)CH50U，可計(jì)算出待測血清中總的補(bǔ)體溶血活性，以CH50U/ml表示。
本試驗(yàn)主要反映補(bǔ)體經(jīng)典活化途徑的溶血功能，其結(jié)果與補(bǔ)體C1～C9各組成分的量及活性均有關(guān)。
1．試劑及配制
(1)緩沖生理鹽水：
①貯存液：
lNa2HPO4•12H2O 2.85g
lKH2PO4 0.27g（加蒸餾水至100毫升，4℃保存）
lNaCl 17.00g
②應(yīng)用液（緩沖液）：5毫升貯存液加95毫升蒸餾水，再加10%硫酸鎂0.1毫升。當(dāng)日配制。12小時(shí)內(nèi)使用。
（2）2%綿羊紅細(xì)胞（From：南京森貝伽生物公司）：無菌采取綿羊血液，于等量Alsever液中可保存3周。用前以緩沖液洗3次，并配成2%細(xì)胞懸液。必要時(shí)可用吸光光度法或細(xì)胞計(jì)數(shù)法使懸液細(xì)胞濃度標(biāo)準(zhǔn)化。
(3)凍干綿羊紅細(xì)胞溶血素（From：南京森貝伽生物公司）（規(guī)格：0.5ml/瓶，0.5ml蒸餾水復(fù)溶）：將本品（效價(jià)1：4000），用緩沖液作1：2000倍稀釋（即0.5ml溶血素加999.5毫升緩沖液）。
(4)待測血清：新鮮血液室溫放置30分鐘，再4℃放置60分鐘，使血塊收縮。4℃離心（3000r/min）10分鐘，取上清，-20℃保存。
2.試管法操作步驟（改良Mayer法）
（1）致敏羊紅細(xì)胞：2%綿羊紅細(xì)胞加等量稀釋后的溶血素（1：2000），混勻，置37℃水浴30分鐘。
（2）稀釋血清：待測血清0.2ml，加緩沖液3.8ml，稀釋度為1：20。
（3）配制溶血標(biāo)準(zhǔn)管：2%綿羊紅細(xì)胞2ml加8ml蒸餾水，混勻，即為全溶血管。取全溶血管液2ml加緩沖液2ml，即為50%溶血管。
（4）按表所示，依次加各成分于試管中，混勻，置37℃水浴30分鐘。第10管為非溶血對照。
補(bǔ)體CH50測定試管法
| 成 分 | 試 管 號 | |||||||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | |
| 1：20待測血清 | 0.10 | 0.15 | 0.20 | 0.25 | 0.30 | 0.35 | 0.40 | 0.45 | 0.50 | - |
| 緩沖液(ml) | 1.40 | 1.35 | 1.30 | 1.25 | 1.20 | 1.15 | 1.10 | 1.05 | 1.00 | 1.50 |
| 致敏紅細(xì)胞（ml） | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
（5）結(jié)果測定：取出試管，2000r/min離心10分鐘，對照管應(yīng)不溶血。肉眼比色，選與50%溶血標(biāo)準(zhǔn)管相近二管，再用分光光度計(jì)測（波長542nm、0.5cm比色杯）OD值，確定與標(biāo)準(zhǔn)管最接近者為終點(diǎn)管，然后按下公式計(jì)算CH50值：血清補(bǔ)體CH50（U/ml）=（1/血清用量）×稀釋度。
如第5管為終點(diǎn)管，測待測血清中CH50為66.7U/ml。血清補(bǔ)體CH50正常值為50-100U/ml。
