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MTT法及臺盼蘭拒染法活細胞增值檢測服務(wù)
點擊次數(shù)：2664 日期：2013/11/29 13:25:21
一、技術(shù)服務(wù)簡介
噻唑藍（MTT）和臺盼藍拒染法是判別細胞活性最常用的兩種方法，MTT法又稱MTT比色法，是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結(jié)晶甲瓚（Formazan）并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細胞中的甲瓚，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數(shù)量。在一定細胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細胞數(shù)成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經(jīng)濟。
二、服務(wù)范圍
應(yīng)用MTT法檢測細胞活性或體外藥物對細胞增殖活性的影響。
三、收費標準
詢價
四、服務(wù)周期
實驗費用以樣本數(shù)和細胞株的種類數(shù)目計算。實驗周期為2~3個星期左右。
五、客戶須知
1. 寄送：委托單位的試驗材料和試劑等均須采用特快專遞形式郵寄，有低溫要求的、固定要求的，按低溫保存、固定防碎方法運輸，以確保實驗物品的安全可靠。
2. 實驗結(jié)束后，本公司將結(jié)果及時發(fā)給客戶：實驗報告書，包括IC50、實驗試劑與設(shè)備、實驗過程、結(jié)果說明、原始數(shù)據(jù)、細胞圖片等
3. 客戶應(yīng)對所提供的材料及信息負責(zé)，如因客戶提供的材料及信息不準確而引起的實驗延誤或經(jīng)濟損失由客戶承擔(dān)。
六、實驗服務(wù)咨詢及技術(shù)支持
公司：南京森貝伽生物科技有限公司
電話：025-66915470
手機：18602534620
傳真：025-52797049
E-mail：senbeijia@163.com
七、技術(shù)步驟
1. 接種細胞：收集對數(shù)期細胞，調(diào)整細胞懸液濃度，每孔加入100ul,鋪板使待測細胞調(diào)密度至1000~10000孔，邊緣孔用無菌PBS填充。
2. 細胞培養(yǎng)：5% CO2，37℃孵育，至細胞單層鋪滿孔底（96孔平底板）。
3. 藥物處理：加入濃度梯度的藥物，原則上，細胞貼壁后即可加藥，或兩小時，或半天時間，但我們常在前一天下午鋪板，次日上午加藥.一般5~7個梯度，每孔100ul，設(shè)3~5個復(fù)孔。
4. 呈色：5% CO2，37℃孵育16~48小時，倒置顯微鏡下觀察。每孔加入20ul MTT溶液（5mg/ml，即0.5% MTT），繼續(xù)培養(yǎng)4h。若藥物與MTT能夠反應(yīng)，可先離心后棄去培養(yǎng)液，小心用PBS沖2~3遍后，再加入含MTT的培養(yǎng)液。
5. 溶解：終止培養(yǎng)，小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液。對于懸浮細胞需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。每孔加入150ul二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩10min，使結(jié)晶物充分溶解。
6. 比色：在酶聯(lián)免疫檢測儀OD490nm處測量各孔的吸光值，記錄結(jié)果，以時間為橫坐標，吸光值為縱坐標，繪制細胞生長曲線。同時設(shè)置調(diào)零孔（培養(yǎng)基、MTT、二甲基亞砜），對照孔（細胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜）。
噻唑藍（MTT）和臺盼藍拒染法是判別細胞活性最常用的兩種方法，MTT法又稱MTT比色法，是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結(jié)晶甲瓚（Formazan）并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細胞中的甲瓚，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數(shù)量。在一定細胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細胞數(shù)成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經(jīng)濟。
二、服務(wù)范圍
應(yīng)用MTT法檢測細胞活性或體外藥物對細胞增殖活性的影響。
三、收費標準
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四、服務(wù)周期
實驗費用以樣本數(shù)和細胞株的種類數(shù)目計算。實驗周期為2~3個星期左右。
五、客戶須知
1. 寄送：委托單位的試驗材料和試劑等均須采用特快專遞形式郵寄，有低溫要求的、固定要求的，按低溫保存、固定防碎方法運輸，以確保實驗物品的安全可靠。
2. 實驗結(jié)束后，本公司將結(jié)果及時發(fā)給客戶：實驗報告書，包括IC50、實驗試劑與設(shè)備、實驗過程、結(jié)果說明、原始數(shù)據(jù)、細胞圖片等
3. 客戶應(yīng)對所提供的材料及信息負責(zé)，如因客戶提供的材料及信息不準確而引起的實驗延誤或經(jīng)濟損失由客戶承擔(dān)。
六、實驗服務(wù)咨詢及技術(shù)支持
公司：南京森貝伽生物科技有限公司
電話：025-66915470
手機：18602534620
傳真：025-52797049
E-mail：senbeijia@163.com
七、技術(shù)步驟
1. 接種細胞：收集對數(shù)期細胞，調(diào)整細胞懸液濃度，每孔加入100ul,鋪板使待測細胞調(diào)密度至1000~10000孔，邊緣孔用無菌PBS填充。
2. 細胞培養(yǎng)：5% CO2，37℃孵育，至細胞單層鋪滿孔底（96孔平底板）。
3. 藥物處理：加入濃度梯度的藥物，原則上，細胞貼壁后即可加藥，或兩小時，或半天時間，但我們常在前一天下午鋪板，次日上午加藥.一般5~7個梯度，每孔100ul，設(shè)3~5個復(fù)孔。
4. 呈色：5% CO2，37℃孵育16~48小時，倒置顯微鏡下觀察。每孔加入20ul MTT溶液（5mg/ml，即0.5% MTT），繼續(xù)培養(yǎng)4h。若藥物與MTT能夠反應(yīng)，可先離心后棄去培養(yǎng)液，小心用PBS沖2~3遍后，再加入含MTT的培養(yǎng)液。
5. 溶解：終止培養(yǎng)，小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液。對于懸浮細胞需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。每孔加入150ul二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩10min，使結(jié)晶物充分溶解。
6. 比色：在酶聯(lián)免疫檢測儀OD490nm處測量各孔的吸光值，記錄結(jié)果，以時間為橫坐標，吸光值為縱坐標，繪制細胞生長曲線。同時設(shè)置調(diào)零孔（培養(yǎng)基、MTT、二甲基亞砜），對照孔（細胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜）。
