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中性紅染色液

點擊下載日期:2013/11/8 10:29:03

一、中性紅染色液簡介:
中性紅是一種弱堿性pH 指示劑,變色范圍pH6.4~8.0之間(由紅變黃)。分子式:C15H16N4•HCl,分子量:288.78。在中性或微堿性環(huán)境中,植物的活細胞能大量吸收中性紅并向液泡中排泌,由于液泡在一般情況下呈酸性反應(yīng),因此,進入液泡的中性紅便解離出大量陽離子而呈現(xiàn)櫻桃紅色,在這種情況下,原生質(zhì)和細胞壁一般不著色;死細胞由于原生質(zhì)變性凝固,細胞液不能維持在液泡內(nèi),因此,用中性紅染色后,不產(chǎn)生液泡著色現(xiàn)象,相反,中性紅的陽離子,卻與帶有一定負電荷的原生質(zhì)及細胞核結(jié)合,而使原生質(zhì)與細胞核染色。
中性紅染色液(Neutral Red stain)是一種組織或細胞染色時常用的可以把細胞核染成紅色的染色液。本染色液常用于組織或細胞染色中細胞核的紅色復(fù)染。
二、中性紅染色液組成:
Neutral Red stain (0.1%) 100ml 500ml ,主要成分:主要由中性紅、去離子水等組成。
自備材料:
1、4%的多聚甲醛,亦可采購森貝伽公司的多聚甲醛溶液(4% PFA)(DF0135)
2、蒸餾水
3、不同濃度的乙醇
三、操作步驟(僅供參考):
1. 樣品處理
a) 對于石蠟切片:二甲苯中脫蠟5~10min。 換用新鮮的二甲苯,再脫蠟5~10min。
無水乙醇5min。 90%乙醇2min。 70%乙醇2min。 蒸餾水2min。
b) 對于冰凍切片:蒸餾水2min。
c) 對于培養(yǎng)細胞:
用4%多聚甲醛固定10min以上。蒸餾水洗滌2min。
換用新鮮的蒸餾水,再洗滌2min。
2. 中性紅染色
a) 對于上述處理好的樣品,用Neutral Red stain (0.1%)染色2~5min
b) 用蒸餾水或自來水充分洗滌。
c) 進行觀察和拍照。
四、注意事項:
1、 如果需要脫水、透明和封片處理,還需自備二甲苯,中性樹膠或其它封片劑。如果樣品
是石蠟切片,需自備70%和90%乙醇,無水乙醇以及二甲苯。
2、 首次使用本試劑時建議先取1~2個樣品做預(yù)實驗。
3、 中性紅染色液可以根據(jù)染色結(jié)果和要求調(diào)整時間。
4、 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
五、有效期: 12個月有效。
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