Bradford法蛋白定量試劑盒說(shuō)明書

點(diǎn)擊下載日期：2014/2/12 9:00:40

一、Bradford法蛋白定量試劑盒簡(jiǎn)介
目前世界上最常用的蛋白濃度檢測(cè)方法是：BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(BCA Protein Assay Kit)和Bradford法蛋白定量試劑盒(Bradford Protein Assay Kit) 。Bradford 法與傳統(tǒng)方法相比，更簡(jiǎn)單、更穩(wěn)定、兼容性更好。
Bradford法測(cè)定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響。樣品中β-巰基乙醇的濃度可高達(dá)1M，DTT的濃度可高達(dá)5mM。但受高濃度的去垢劑的影響，故在用Bradford Protein Assay Kit進(jìn)行蛋白定量的時(shí)候，需確保SDS低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20, 60, 80低于0.015%。含高濃度去污劑的蛋白定量，建議采用Leagene BCA Protein Assay Kit。
Leagene Bradford Protein Assay Kit檢測(cè)速度很快，少量樣品一般只需10min即可完成檢測(cè)。檢測(cè)濃度下限達(dá)到25μg/ml，最小檢測(cè)蛋白量達(dá)到0.5μg，待測(cè)樣品體積為1～20μl。在50~1000μg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。
二、Bradford法蛋白定量試劑盒組成
試劑(A): G250染色液 100m 200ml 4℃ 避光
試劑(B): 蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA 5mg/ml) 1ml 2ml -20℃
Bradford法蛋白定量試劑盒主要成分：
試劑(A): 主要由G250、緩沖液等組成。
試劑(B): 主要由牛血清白蛋白(BSA)、防腐劑等組成。
三、自備材料
1、酶標(biāo)儀或分光光度計(jì) 2、微量移液器 3、雙蒸水 4、 96孔板
操作步驟（僅供參考）：
1、完全溶解蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA 5mg/ml)，按蛋白標(biāo)準(zhǔn):稀釋液=1:9進(jìn)行稀釋，如取蛋白標(biāo)準(zhǔn)10μl稀釋溶解于稀釋液90μl，使終濃度為0.5mg/ml。注意，蛋白樣品在什么溶液中，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也宜用什么溶液稀釋。也可以用0.9%NaCl或PBS稀釋蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA 5mg/ml)。
2、將標(biāo)準(zhǔn)品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl加到96孔板的蛋白標(biāo)準(zhǔn)孔中，加蛋白標(biāo)準(zhǔn)稀釋
液補(bǔ)足到20μl。
3、加適當(dāng)體積樣品到96孔板的樣品孔中，補(bǔ)加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液到20μl。
4、各孔加入200μl G250染色液，室溫放置3～5min。
5、用酶標(biāo)儀測(cè)定A595，或560~610nm之間的其它波長(zhǎng)的吸光度。
6、根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中的蛋白濃度。
四、Bradford法蛋白定量試劑盒操作注意事項(xiàng)
1、 G250染色液使用前充分混勻。
2、 G250染色液回復(fù)至室溫再使用，有利于提高檢測(cè)的靈敏度。
3、蛋白標(biāo)準(zhǔn)在全部溶解后先混勻，再稀釋成一系列不同濃度的蛋白標(biāo)準(zhǔn)。
4、待測(cè)蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也宜溶解于什么樣的稀釋液中，否者待測(cè)蛋白與蛋白標(biāo)準(zhǔn)中所含非蛋白成分不一致，有可能導(dǎo)致測(cè)定不準(zhǔn)確。
5、需可檢測(cè)560~610nm之間波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀一臺(tái)，最佳檢測(cè)波長(zhǎng)為595nm，并需96孔板。
6、建議每次測(cè)定時(shí)都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。因?yàn)闇y(cè)定時(shí)顏色會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深，并且顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān)，所以除非精確控制顯色反應(yīng)的時(shí)間和溫度，否則如需精確測(cè)定宜每次都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
7、如果沒有酶標(biāo)儀，也可以使用普通的分光光度計(jì)測(cè)定，但測(cè)定時(shí)，考慮根據(jù)比色皿的最小檢測(cè)體積。應(yīng)按比例適當(dāng)加大BCA工作液的用量使總體積不小于最小檢測(cè)體積，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的用量亦相應(yīng)按比例放大。使用分光光度計(jì)測(cè)定蛋白濃度時(shí)，每個(gè)試劑盒可以測(cè)定的樣品數(shù)量可能會(huì)顯著減少。
8、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
有效期： 12個(gè)月有效。

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